一、产品概述
由艾美捷Bethyl Laboratories推出的NCoR抗体（货号：A301-145A）是一款靶向人类核受体辅阻遏蛋白1（NCoR）中间区域（第1525–1575位氨基酸）的兔源多克隆抗体。该抗体以全IgG形式提供，经抗原亲和纯化，未偶联标记物，浓度为1000 µg/ml，适用于染色质免疫沉淀（ChIP）、免疫沉淀（IP）及蛋白质印迹（WB）等多种应用场景，是研究核受体介导的转录抑制、组蛋白去乙酰化及染色质重塑机制的重要工具。
二、关键规格参数
2.1 免疫原与表位特异性
免疫原对应人类核受体辅阻遏蛋白1（NCOR1）第1525至1575位氨基酸之间的区域，参考序列号为NP_006302.2（GeneID 9611）。该区域位于蛋白的中部结构域，远离N端的SANT结构域和C端的HDAC结合区，可有效识别全长NCoR蛋白，同时避免与其他含类似重复序列的蛋白（如NCoR2/SMRT）发生非预期交叉反应。
2.2 物理与生化性质
参数 | 详情
靶点 | NCoR（核受体辅阻遏蛋白1）
宿主 | 兔
克隆性 | 多克隆
形式 | 全IgG
纯化方式 | 抗原亲和纯化（使用固定化表位）
浓度 | 1000 µg/ml（A280法测定，1 mg/ml IgG吸光度1.4）
缓冲液 | Tris-柠檬酸/磷酸缓冲液，pH 7-8，含0.09%叠氮钠
同型对照 | IgG
抗原种属 | 人类
反应种属 | 该信息未明确列出（免疫原为人源，建议在人类样本中验证；对小鼠NCoR可能有交叉反应，需自行测试）
2.3 储存与稳定性
储存于2–8°C，严禁冷冻。自收货之日起有效期一年。缓冲液中的叠氮钠可作为抗菌防腐剂，但在用于ChIP实验前，建议通过透析或稀释降低叠氮钠浓度（通常至0.01%以下），以免影响染色质片段化或后续酶反应。
三、应用方法与推荐用量
3.1 染色质免疫沉淀（ChIP）
推荐用量：2 µg 抗体 / 每次ChIP反应。
适用技术：ChIP-qPCR 或 ChIP-seq。
注意事项：
染色质片段化推荐使用超声或微球菌核酸酶消化，片段长度控制在200–600 bp。
建议每ChIP反应使用10–25 µg 染色质（以DNA含量计）。
需设置阴性对照（兔IgG）和阳性对照（如抗H3K4me3或抗RNA Pol II抗体）。
3.2 免疫沉淀（IP）
推荐用量：6 µg 抗体 / mg 总蛋白裂解液。
操作要点：
使用非变性裂解液（如含150 mM NaCl、1% NP-40、50 mM Tris pH 7.5）并补充蛋白酶抑制剂。
推荐4°C旋转孵育2–4小时或过夜。
使用蛋白A/G琼脂糖珠或磁珠捕获免疫复合物。
3.3 蛋白质印迹（WB）
推荐稀释比：1:500 – 1:1000。
特殊凝胶建议：推荐使用3-8% Tris-乙酸盐（Tris-acetate）梯度凝胶，因为NCoR蛋白分子量较大（约270 kDa），传统Tris-甘氨酸凝胶难以有效分离高分子量蛋白。
标准操作流程：
封闭液与抗体稀释液：含5%脱脂牛奶的TBST。
一抗孵育：推荐4°C过夜。
二抗系统：对于细胞裂解液直接WB，使用山羊抗兔IgG（H+L）抗体（货号A120-101P）；对于IP产物的WB，必须使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体，并在封闭缓冲液中添加5%正常猪血清（货号S100-020）以降低重链干扰。
四、产品背景与生物学意义
4.1 NCoR的功能机制
核受体辅阻遏蛋白NCoR（又称NCOR1）是核受体转录抑制的核心调控因子。它通过以下机制介导基因沉默：
1. 核受体结合：与未配体的甲状腺激素受体、视黄酸受体、雌激素受体、雄激素受体、孕激素受体及糖皮质激素受体等互作。
2. 募集辅阻遏复合物：通过C末端结构域与SIN3A/SIN3B结合，进而招募组蛋白去乙酰化酶HDAC1和HDAC2。
3. 染色质致密化：HDAC去除组蛋白乙酰基，使染色质结构紧缩，抑制转录因子进入DNA。
NCoR在发育、代谢、炎症及癌症中均有重要功能。
4.2 研究应用方向
研究方向 | 应用方式 | 说明
核受体信号转导 | ChIP-qPCR | 检测NCoR在特定基因启动子或增强子上的富集变化，观察激素处理后的解离/招募
表观遗传调控 | ChIP-seq | 全基因组水平分析NCoR结合图谱，识别辅阻遏网络
蛋白-蛋白相互作用 | IP + WB | 验证NCoR与HDAC1、HDAC2、SIN3A或核受体的内源结合
蛋白表达水平检测 | WB | 比较不同组织、处理或疾病状态下NCoR蛋白表达量
