「1图1表格」从Mallory到Masson染色：洞察肌纤维免疫组化三颜色的奥秘

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接下来我们将会开启“废话”模式，在图片内容的基础上，唠一唠Masson三色染色法的历史、染色原理、核心操作步骤的关键机制。

一、百年传承：从Mallory到Masson

1880年代，美国病理学家Frank Burr Mallory首次在组织切片的染色过程中使用苯胺蓝（Aniline Blue），目的是让组织中的胶原纤维显色。但是该技术仅能粗略显色纤维结构，不能区分纤维类型。

1929年，法国/加拿大病理学家Claude L. Pierre Masson对Mallory法进行改良，实现了三色体系：细胞核呈现蓝黑色，胞质、肌纤维为红色，胶原纤维为蓝色或绿色。时至今日，Masson三色染色仍被《Theory and Practice of Histological Techniques》（第8版）收录，是结缔组织染色领域的参考方法之一。

二、Masson染色技术原理拆解

因为染料分子大小与组织渗透性存在差异，在Masson染色过程中，先将多种成分染成红色，再通过选择性分化去除胶原中的红色，接着用苯胺蓝将胶原纤维染成蓝色，与肌纤维形成鲜明的颜色对比。

整个染色过程可以拆分为四步：

01核染

Weigert铁苏木素与DNA稳定结合。铁离子的存在增强了染料结合的稳定性，在后续酸性环境中不掉色。

02胞质红染

酸性品红-丽春红与细胞质中的蛋白质通过静电结合，肌纤维、胶原纤维等被染成红色。其中丽春红分子量大，结合牢固，酸性品红分子量小，渗透性强，二者协同作用使细胞质着色均匀。

03磷钼酸分化

磷钼酸在Masson染色中具有双重作用，既是选择性分化剂又是媒染剂，实现胶原纤维与肌纤维清晰区分的关键。磷钼酸可以置换出胶原纤维中的红色染料，但不能从致密的肌纤维和细胞质中去除该染料。磷钼酸中的酸性基团可作为桥梁，连接去色后的胶原纤维与后续染料，增强其结合力，提高染色对比度。

04终染

苯胺蓝或亮绿属于大分子酸性阴离子染料，与胶原纤维形成稳定复合物，将其染成蓝色或绿色，实现与肌组织、细胞质的色彩区分。

三、Masson配方详解：从“抄配方”到“懂配伍”

目前商用试剂很成熟，价格也不高，建议大家直接买就行。

如果非要自己配置，可以参考下列配方：

1. Weigert氏铁苏木素液

A液：苏木素1g+无水乙醇100mL

B液：30%三氯化铁水溶液4mL + 蒸馏水95mL + 盐酸1mL

现用现配。使用时将A液和B液等量混合，混合后溶液呈紫黑色。提前配会氧化失效。

2. 丽春红酸性品红液

丽春红0.7g，酸性品红0.3g，蒸馏水99mL，冰醋酸1mL，溶解后过滤。

冰醋酸用来调pH，避免染料沉淀，染色效果更稳定

3. 1%磷钼酸溶液

磷钼酸1g加蒸馏水99mL，充分溶解后过滤备用。

正常为淡黄色，变蓝会失效，需要重新配

4. 2%苯胺蓝染液

苯胺蓝2g加蒸馏水98mL，再加冰醋酸2mL，充分溶解后过滤备用。

可以换成1%亮绿染液，亮绿1g+蒸馏水98mL+冰醋酸2mL

5. 1%盐酸酒精分化液：浓盐酸1mL加无水乙醇99mL，混合均匀。

6. 1%盐酸终止液：浓盐酸1mL加蒸馏水99mL，混合均匀。

Masson通过核染、红染、选择性分化、终染四步递进的染色过程，实现细胞核、肌纤维与胶原纤维的三色区分，是结缔组织病理染色的经典免疫组化实验之一。