在上期教程中，我们分享了如何使用ImageJ计算颗粒粒径及绘制粒径分布图，但是整个处理过程需要自己动手画直径，这样比较麻烦，而且计算过程具有一定的主观性。另外，当需要处理多张图片的颗粒粒径时，效率非常低下。那么本期教程我们来学习使用Image J自动计算多张图片的颗粒粒径。
1.打开Image J软件，跳出弹窗，如下图所示；
2.点击File—Import—Image Sequence—选择需要处理多张图片的文件夹，
选择第一张图片，点击打开（注：可批量处理多张图片，注意图片格式和图片标尺为一致）；在跳出的对话框，确认一下图片数量是否正确；
3.依次点击Image—Type—8bit；
4.点击直线工具，对标尺进行设定，按住Shift临摹标尺；
5.点击Analyze—Set scale，在跳出的对话框，在Known distance和Unit of length 分别设置为尺寸，如300和μm；
6.点击Image—Adjust—Threshold—在跳出的对话框，点击调节阈值，红色为选中部分，尽量调节红色部分布满颗粒。
7.点击Process—Binary—Watershed，分割相连的颗粒，在跳出的对话框，是否选择所有图片，点击Yes。
8.点击Analyze—Analyze Particles—在跳出的对话框，设置自动参数，对Size和Circularity进行设置，依次勾选下面的参数；
9.在跳出的对话框，点击File—Save As，右侧的MinFeret为最小费雷特直径，一般规则选择的圆形颗粒，选择MinFeret即可，对于比较不规则的颗粒，可以自行计算最大费雷特直径FeretAngle和最小费雷特直径MinFeret的几何平均值来表示粒径大小。
10. 打开Graphpad软件，导入数据；
11.点击New Analysis—Normality and Lognormality Tests，在跳出的对话框，点击ok；
12.点击回到数据，点击Analyze—Frequency distribution—在跳出的对话框—在Graph—勾选Graph the results—在Graph type处，选择XYgraph，Histogram spikes;
13.点击左侧的Histogram of Data 1，右侧跳出柱状图；
14.接着点击Analyze—在xy analyses—Nonlinear regression（curve fit），在跳出的对话框，选择Gaussian—Gaussian；
在跳出的图形如下图所示：
15.接着对图形进行细节美化，其中包括柱状图颜色、曲线颜色、修改标题、坐标轴等，其最终效果图如下图所示：
ImageJ 自动分析多张图片颗粒粒径，不再依赖人工逐张操作，而是由程序自动完成图像分割与统计分析全过程，从而实现标准化、可重复、高效率的粒径测量。其核心是通过固定算法参数（如统一标尺、阈值分割方法、分水岭规则和颗粒筛选条件），让软件自动识别图像中的每一个颗粒边界，并批量输出面积、等效直径、Feret 直径等粒径指标。相比人工测量，自动计算的优势在于速度快、主观性低、结果可复现、适合大样本统计和粒径分布分析，因此在材料、食品、纳米颗粒和生物显微图像分析中，是最常用、也是最标准的粒径定量方法。
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